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实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制
2014/4/1 16:18:11
生物标本常用染料性能简介 (一)天然染料 1、苏木精 苏木精是从南美的苏木(热带豆科植物)干枝中用乙醚浸制出来的一种色素,是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色,必须暴露在通气的地方,使他变成氧化苏木精(又叫苏木素)后才能使用,这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。 苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体,易溶于酒精,微溶于水和甘油,是染细胞核的优良材料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸—酒精)分化后呈红色,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。 2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后,磨成粉末,提取出虫红,再用明矾处理,除去其中杂质,就制成洋红。单纯的洋红不能染色,要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,碱性溶液有氨水、硼砂等。 洋红使细胞核的优良染料,染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜,尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。 (二)人工染料 人工染料,即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。 1、酸性品红 酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染,能显示线粒体。 组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。 2、刚果红 刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。他能作染料,也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。 3、甲基蓝 甲基蓝是弱酸性染料,能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞,也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化,因此用他染色后不能长久保存。 4、固绿 固绿是酸性染料,能溶于水(溶解度为4%)和酒精(溶解度为9%)。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂,在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。 5、苏丹Ⅲ 苏丹Ⅲ是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。 6、伊红 这类染料种类很多。常用的伊红Y,是酸性染料,呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状,溶于水(15摄氏度是溶解度达44%)和酒精(溶于无水酒精的溶解度为2%)。伊红在动物制片中广泛应用,是很好的细胞质染料,常用作苏木精的衬染剂。 7、碱性品(复)红 碱性品红是碱性染料,呈暗红色粉末或结晶状,能溶于水(溶解度1%)和酒精(溶解度8%)。碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁,又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。在 尔根氏反应中用作组织化学试剂,已核查脱氧核糖核酸。 8、结晶紫 结晶紫是碱性染料,能溶于水(溶解度9%)和酒精(溶解度8.75%)。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广,是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的,用来显示染色体的中心体,并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时,用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色,染色体染成红色,纺锤丝染成紫色,所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛,效果也很好。用结晶紫染色的切片,缺点是不易长久保存。 9、龙胆紫 龙胆紫是混合的碱性染料,主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是,龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水,主要成分是甲基紫,需要时能代替龙胆紫和结晶紫。 10、中性红 中性红是弱碱性染料,呈红色粉末状,能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色,在强碱性溶液中呈蓝色,而在弱酸性溶液中呈红色,所以能用作指示剂。中性红无毒,常做活体染色的染料,用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液,用作显示尼尔体的常用染料。 11、番红 番红是碱性染料,能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料,能染细胞核、染色体和植物蛋白质,示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织,还能染孢子囊。 12、亚甲蓝或美蓝 亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。 13、甲基绿 甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。 把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中,边加边搅拌,如果产生沉淀,要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用(存放时间较久而产生沉淀是,取上层清液使用,不必重新配制)。 本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖,可测出0.15 ~0.20%的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时,如果未知物中有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。 配方二 裴林(Fehling)溶液 (1)把34.5克硫酸铜溶于500毫升蒸馏水中。 (2)把125克氢氧化钾(钠)和173克酒石酸钾钠溶解在500毫升蒸馏水中。 上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时,使他们等量的混合,加入待测物的试管内,加热到沸腾。如果有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。 2、检查淀粉的试剂 鲁哥氏(Lugol’s)溶液(碘液) 取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中,搅拌到溶解后,加入4克碘,等碘充分溶解,在加入80毫升蒸馏水,贮存在棕色试剂瓶内。 碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉,也用作染色剂,例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。 3、检查蛋白质的试剂 配方一 米伦(Millon)试剂 在60毫升浓硝酸(比重1.42)中溶解40克汞(水浴加温可助溶),溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释,静置澄清后,取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。 在待测物中加入少量米伦试剂,加热,如果有蛋白质,会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。 配方二 双缩尿试剂 分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液。 在3毫升待测物中加入1毫升10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质,会出现紫色反应。 4、检查脂肪的试剂 苏丹Ⅲ(Ⅳ)酒精饱和溶液 取0.2克苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ),放入纯酒精中,加热,使它充分溶解,成为饱和酒精溶液,过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。 5、酸碱指示剂 配方一 酚酞试剂和试纸 酚酞试剂 取1克酚酞,溶解在100毫升60%的酒精溶液里,装在试剂瓶内密闭保存。 酚态试纸 取1克酚酞,溶解在100毫升95%酒精溶液里,加入00毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后,取出,放在无氨气影响处晾干。 酚泰试剂(试纸) pH值变色范围8.2~10,在酸性和中性溶液中都无色,再碱性溶液中呈深红色。 配方二 红蓝石蕊试纸 取市售石蕊1克,放在80毫升10%酒精溶液中搅拌,使它溶解,然后过滤。把滤液分成两份。1份滴入稀磷酸或稀硫酸,到出现红色为止。另1份滴入稀氢氧化钠溶液,到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条,随后取出滤纸条,放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干,即的红、蓝两种石蕊试纸。 红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝,蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。 6、检查二氧化碳的试剂 检查二氧化碳的试剂,可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。 配方一 溴代麝香草酚蓝溶液 取0.1克溴代麝香草酚蓝,溶解在100毫升蒸馏水里,滴入少量0.1%氢氧化钾溶液,使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。 溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色范围是6.0(黄)~7.6(蓝)。待测物中如果有二氧化碳,会形成碳酸而使溶液变成黄色。 配方二 石灰水 在蒸馏水中加入生石灰(氧化钙),变加边搅拌,直到加入的生石灰不再溶解,呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后,倾出上层清液,用滤纸过滤,放在密闭瓶内保存。 如果测定的物质中有二氧化碳,会生成碳酸钙,使石灰水变浑浊。 7、检查细胞生活力的试剂 检查细胞有无生活力,可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制1%中性红溶液和1%甲基蓝溶液,这两种溶液各取1份混合,用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色,而使死细胞全部染成蓝色。 (二)分离液 1、肌细胞分离液 配方一 马克凯郎(Maccallum)液 取1份浓硝酸、2份甘油、3份水,混合后就得到马克凯郎液。 把新鲜的肌肉组织小块(横纹肌、心肌和平滑肌)投入这种溶液里浸渍,分离时间需1~3日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。 配方二 氢氧化钾溶液 取35克氢氧化钾,放在100毫升蒸馏水中,加热,使它完全溶解后,在室温下冷却。 把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中,浸泡15~30分钟后,肌细胞便可分离。 2、上皮细胞分离液 配方一 福尔马林—氯化钾溶液 称取58.44克氯化钠,用蒸馏水溶解,再稀释到1000毫升,加入2毫升福尔马林。 这种溶液是很好的上皮细胞分离液,分离很迅速,而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块,放在此溶液里2小时即可分离,口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需3日左右。 配方二 水和氯醛溶液 称取5克水和氯醛,用蒸馏水溶解,再稀释到100毫升,就得到5%水合氯醛溶液。 从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块,投入以上溶液中,浸泡24~48小时。 3、神经细胞分离液 配方一 可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林—氯化钠溶液来分离神经细胞(见2)。 配方二 硼酸生理盐水溶液 在生理盐水溶液内加入一些硼酸,搅拌到不再溶解时为止,使成为饱和溶液。 把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。 4、植物茎细胞分离液 杰弗里氏(Jeffrey’s)液 取等量的10%铬酸溶液和10%硝酸溶液混合,成铬酸—硝酸溶液。 这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里,加热煮沸,冷却后再加热煮沸。这样重复几次,到材料全部沉于水底后,投入分离液内,分离时间是24~48小时。 5、植物根尖细胞分离液 配方一 盐酸—酒精溶液 在1份95%酒精中慢慢的加入1份浓盐酸,即成盐酸—酒精溶液,装瓶密闭保存。 把植物根尖部位截下一小段,投入以上溶液中分离。 配方二 4%盐酸溶液 配制4%盐酸溶液。 截下植物根尖部位,投入盛有4%盐酸溶液的小烧杯内,在60摄氏度温水中隔水温热1~2分钟,使根尖软而不酥,这时分离效果最好。 6、植物纤维分离液 取10克氢氧化钠(或氢氧化钾),溶解在90毫升水里,制成10%氢氧化钠(或氢氧化钾)溶液,放在瓶里密闭保存。 把植物茎纵切成细条,剪成小段后,投入分离液内。 7、植物细胞质壁分离液 配方一 30%蔗糖溶液 取30克蔗糖,溶解在70毫升蒸馏水里,装瓶备用。 配方二 5%氯化钠溶液 取5克食盐,溶解在95毫升蒸馏水里,装瓶备用。 配方三 5%硝酸钾溶液 取5克硝酸钾,溶解在95毫升蒸馏水里,装瓶备用。 (三)生理盐水 配方一 各种动物需用的生理盐水 哺乳类 需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到100毫升。 鸟类 需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。 两栖类 需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。 配方二 任氏(Ringer’s)生理盐水 氯化钠 6.5克 碳酸氢钠 0.2克 氯化钾 0.14克 磷酸二氢钠 0.01克 氯化钙 0.12克 先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中,混合后用蒸馏水稀释到980毫升。然后取氯化钙溶解在20毫升蒸馏水中,把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内,边滴、边搅拌,以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。 此溶液用于变温动物,尤其常用于两栖类。 配方三 乐氏(Locke’s)生理盐水 氯化钠 9.0克 碳酸氢钠 0.1~0.3克 氯化钾 0.42克 氯化钙 0.24克 把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解,混合后加蒸馏水到980毫升。把氯化钙溶解在20毫升蒸馏水里,逐滴加入上述溶液中。 以上溶液用于恒温动物,尤其常用于哺乳类。 (四)培养液 1、人造海水 配方一 氯化钠( ) 24.72克 氯化钾( ) 0.67克 氯化钙( ) 1.36克 氯化镁( ) 4.66克 硫酸镁( ) 6.29克 碳酸氢钠( ) 0.18克 蒸馏水 加到1升 把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中,再加入碳酸氢钠,最后用蒸馏水稀释到1000毫升。 配方二 氯化钠 45.0克 硫酸镁 0.1克 氯化镁 5.0克 氯化铁(1%溶液) 1滴 先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙溶解在20毫升蒸馏水里,把此溶液逐滴加到上述溶液内,装瓶保存。 配方二 克诺普氏(Knop’s)溶液 硝酸钾 1克 硫酸镁 1克 磷酸二氢钾 1克 硝酸钙 3克 先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙,用20毫升蒸馏水溶解,加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀,在使用是必须摇动。 在以上溶液中加入蔗糖溶液(1~4%),能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。 3、植物无土培养液 配方 霍格伦德(Hoagland)和斯纳德(Snyder)液 硝酸钙 0.821克 硝酸钾 0.506克 磷酸二氢钾 0.136克 硫酸镁 0.120克 酒石酸铁 0.005克 把上述盐类溶解在少量蒸馏水里,然后稀释到1000毫升。 (五)培养基 1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克 氯化钠 0.5克 琼脂 1.5克 水 1000毫升 在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。 配方四 根瘤菌培养基 葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克 碳酸钙 3克 硫酸镁( ) 0.2克 酵母粉 0.4克 琼脂 20克 水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。 2、放线菌培养基 配方一 淀粉琼脂培养基(高氏培养基) 可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克 磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克 硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克 琼脂 2克 水 1000毫升 先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用。 配方二 面粉琼脂培养基 面粉 60克 琼脂 20克 水 1000毫升 把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。 3、真菌培养基 配方一 萨市(Sabouraud’s)培养基 蛋白胨 10克 琼脂 20克 麦芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 配方二 马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。 把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三 黄豆芽汁培养基 黄豆芽 100克 琼脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。 把这培养基的pH值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。 配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80粒 琼脂 5克 水 200毫升 取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。 4、食用菌菌种培养基 配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 18克 把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。 配方二 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 (六)染色剂 1、细菌染色剂 配方一 齐氏(Ziehl)石炭酸品红染液 甲液 取石炭酸5克,溶解在95毫升蒸馏水中。 乙液 取0.3克碱性品红,放入研钵中研磨,逐渐加入10毫升95%酒精,继续淹没,使它溶解。 将甲液和乙液混合后,摇匀,过滤,装瓶,备用。 配方二 罗氏(Loeffler’s)美蓝染液 甲液 取5克美蓝,溶于100毫升95%酒精中,制成美蓝—酒精饱和液。 乙液 取氢氧化钾0.01克(或1%氢氧化钾溶液1毫升),溶液也可用于放线菌染色,0.1%浓度可用于酵母菌染色。 配方三 革兰氏(Gram’s)染液 用此液染色因先用甲液染色,再加乙液固定,用丙液处理,最后用丁液复染。四种液体的配方如下: 甲液(结晶紫液) (1)结晶紫 2克 95%酒精 20毫升 (2)草酸铵 0.8克 蒸馏水 80毫升 使用钱江(1)、(2)液相混,静置48小时后使用。 乙液(碘液) 碘 1克 碘化钾 2克 蒸馏水 300毫升 将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘,待碘全部溶解后,加水稀释至300毫升。 丙液 95%酒精溶液 丁液(番红花红液) 2.5%番红花红酒精溶液 10毫升 蒸馏水 100毫升 2、细菌特殊染色剂 配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后,用乙液复染。 甲液 取5克孔雀绿,加入少量蒸馏水,使它溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,即成孔雀绿染液。 乙液 取番红花红0.5克,加入少量蒸馏水,使它溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,集成番红花红复染液。 配方二 荚膜染液 此配方先用甲液染色,后用乙液复染。 甲液 取结晶紫0.1克,溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100毫升,再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。 乙液 取硫酸铜( )31.3克,溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100毫升,即成20%硫酸铜脱色剂。 配方三 鞭毛染液 甲液 饱和明矾溶液 2毫升 5%石炭酸溶液 5毫升 20%丹宁酸溶液 2毫升 乙液 碱性品红 11克 95%酒精 100毫升 使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混,过滤即可。 3、植物细胞壁染色剂 配方一 纤维素细胞壁染液(Ⅰ) 取固绿0.1克,溶于100毫升95%酒精中,即成0.1%固绿—酒精溶液。 该液能染色纤维素细胞壁,还用于动植物中作浆质染色剂。 配方二 纤维素细胞壁染液(Ⅱ) 氯化锌 20克 碘化钾 6.5克 碘 1.5克 蒸馏水加至100毫升 先把氯化锌溶于少量蒸馏水中,再加入6.5克碘化钾,在碘完全溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,即成碘—氯化锌溶液。 该染液能把细胞壁染成紫色,胞质染成淡黄色,胞核染成棕色。 配方一 纤维素细胞壁染液(Ⅲ) 甲液 取1克碘和1.5克碘化钾,溶于100毫升蒸馏水中,即成1%碘液。 乙液 取7份硫酸和3份蒸馏水相混,即成66.5%硫酸溶液。 染色时,在材料上滴加甲液,再加一滴乙液,纤维素细胞壁就染成黄色。 配方四 木质化细胞壁染液(Ⅰ) 硫酸化苯胺(或盐酸话本安) 1份 蒸馏水 70份 95%酒精 30份 硫酸 30份 将上述各组分相混,将细胞材料放入混合液里染色,可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。 配方五 木质化细胞壁染液(Ⅱ) 取间苯三酚4~5克,溶于100毫升95%酒精中,即成间苯三酚—酒精液。 先在材料上滴上1滴浓盐酸,然后滴上间苯三酚—酒精液1滴,木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。 配方六 木质化细胞壁染液(Ⅲ) 取1克番红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%番红溶液。 4、细胞质染色剂 配方一 伊红染液 伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。 (1)取1克伊红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%伊红水溶液(市售红墨水内含伊红成分,可以用红墨水稀释液来代替本溶液)。 (2)取1克伊红,溶于99毫升70%酒精中,即成1%伊红—酒精溶液。 配方二 甲基蓝染液 取1克甲基蓝,溶于29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸馏水,即成1%甲基蓝染液。 配方三 亮绿染液 取0.5克亮绿,溶解在100毫升蒸馏水中,即成0.5%亮绿溶液。 5、细胞核染色剂 配方一 甲基绿染液 取1克甲基绿,溶于99毫升蒸馏水中,加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核,还用来染木质化细胞壁。 配方二 龙胆紫染液 取1克龙胆紫,溶于少量2%醋酸溶液中,加2%醋酸溶液,直到溶液不呈深紫色止。 配方三 美蓝(亚甲基蓝)染液 取0.5克美蓝,溶于30毫升95%酒精中,加100毫升0.01%氢氧化钾溶液,保存在棕色瓶内 。 此溶液能染细胞核,还用来染细菌、血和神经组织等。 配方四 硼砂—洋红染液 取4克硼砂,溶于96毫升蒸馏水中。再加入2克洋红,加热溶解后煮沸30分钟,静置3日,用100毫升70%酒精冲淡,放置24小时后过滤。 此染液能染细胞核,还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色,如水螅、血吸虫等整体标本。 配方五 德氏(Delafield’s)苏木精染液 甲液 取1苏木精,溶于6毫升无水酒精中,即成苏木精—酒精溶液。 乙液 取10克铵矾溶于90毫升蒸馏水中,即成10%铵矾水溶液。 取甲液逐滴加入到乙液中,用纸遮盖,放在阳光明亮处,使它充分氧化。3~4天后将溶液过滤,在滤液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇,保存在密闭玻璃瓶内。静置1~2个月,待该液颜色变深时过滤,可长久保存。 本染液是染色体的优良染色剂,除能染细胞核外,还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。 配方六 席夫(Schiff’s)试剂 称取0.5克碱性品红,加到100毫升煮沸的蒸馏水中,再微微加热5分钟,不断搅拌,使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤,滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠( )或无水亚硫酸氢钠( )。把溶液装入棕色试剂瓶内,摇荡后,塞紧瓶塞,放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时,加入0.5克活性炭,用力摇荡1分钟,过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内,塞紧瓶塞,滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光(瓶外用黑纸或暗盒遮光)。如溶液变成红色,即失去染色能力。 碱性品红是较强的核染色剂,在孚尔根氏(Feulgen’s)反应中作为组织化学试剂,以检查DNA。 6、染色体染色剂 配方一 醋酸—洋红染液 取45毫升冰醋酸,加蒸馏水55毫升,煮沸后徐徐加入洋红1克,搅拌均匀后加入1颗铁锈钉,煮沸10分钟,冷却后过滤,贮存在棕色瓶内。 配方二 醋酸—地衣红染液 取45毫升醋酸,跟55毫升蒸馏水相混,加热,徐徐加入地衣红粉末1~2克,搅拌溶解后,缓缓煮沸2小时。冷却后过滤,贮存在棕色瓶里。 配方三 龙胆紫染液 取1克龙胆紫,用少量蒸馏水溶解后,加蒸馏水,稀释到100毫升,保存在棕色瓶内。 配方四 甲苯胺蓝染液 取0.5克甲苯胺蓝,溶解在100毫升蒸馏水中,即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。 7、线粒体染色剂 配方一 詹钠斯绿B(Janu’s green 酒精饱和溶液 取125毫升詹钠斯绿B,加入到62.5毫升无水酒精中,搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱和染液。 (1)取詹钠斯绿酒精饱和染液按1:30000比例加蒸馏水稀释,用来染原生动物线粒体。 (2)取詹钠斯绿酒精饱和液,按1:10000比例加蒸馏水稀释,用来染新鲜蛙血线粒体。 配方二 詹钠斯绿B中性红染液 先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法:取125毫升中性红,加入到50毫升无水酒精中,搅拌。 在10毫升生理盐水(两栖类生理盐水浓度为0.65%;哺乳类生理盐水浓度为0.9%)中,加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7~1毫升,中性红酒精饱和液2毫升,混合。 詹钠斯绿B稀释液是活体染液。 8、脂肪染色剂 苏丹Ⅲ染液 取0.1克苏丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%苏丹Ⅲ染液。 这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。 9、血液染色剂 配方一 瑞氏(Wright’s)染液 取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存,即可使用。新鲜配制的染液偏碱性,放置后呈酸性,染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4~6.8。因此,染色时加入缓冲液,可维持一定的酸碱度,使染色效果更好。 这种染液除能染血液,还能染疟原虫。 瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝,溶解后放在锅内,蒸上1小时,取出冷却后过滤。在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升,随加、随搅拌,使混合液呈紫色。静置一夜后,用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物,在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。 配方二 甲基紫染液 取甲基紫0.5克,加到100毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。 10、吸虫染色剂 梅耶氏(Mayer’s )明矾—洋红染液 取铵明矾(硫酸铝铵)5克,溶于95毫升蒸馏水中,再加入0.5克洋红酸,加热溶解,冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂,如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚(石炭酸)等,以防生霉。 这种染液适合于染小型动物材料,如吸虫等寄生虫的整体,也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。 11、活体染色剂 配方一 中性红染液 先配成1%中性红水溶液(1克中性红溶于100毫升蒸馏水中)。取这种溶液1毫升,用0.6%生理盐水(或蒸馏水)稀释到50毫升,即成0.02%中性红水溶液,贮存在棕色瓶里,放在黑暗处。 本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。 配方二 尼罗蓝(Nile Blue)染液 取0.1克尼罗蓝,溶解于1000~1500毫升蒸馏水中,即成尼罗蓝染液。 这种染液能把原生动物大核染成绿色,食物泡染成蓝色。 配方三 亚甲蓝染液 取0.1克亚甲蓝,溶解于1000毫升蒸馏水中,即成亚甲蓝染液。 这种染液用于原生动物的活体染色。 12、透明骨骼标本染色剂 配方一 茜素红染液(Ⅰ) 取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。在这种混合液中方入少量茜素红,制成茜素红饱和溶液。 配方二 茜素红溶液(Ⅱ) 取1克茜素红,溶于100毫升95%酒精中,搅拌,然后跟900毫升1%氢氧化钾溶液相混,即成深紫色的茜素红染液。 (七)固定液和保存液 用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等,能保存组织内细胞的形态、结构及其组成,尽量使它近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用,分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等,前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便,缺点是有一定的局限性,不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成,使各自的优缺点相互补充,成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦,但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸—酒精混合液、福尔马林—醋酸—酒精液、包因氏固定液等。 常用的保存液大致跟固定液相同,主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要,再保存液中增加某些药品(如原生标本的保存液)。 1、福尔马林 福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强,所以防腐性强,渗透力大,固定得快。永福尔马林固定精细的解剖标本时,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。 固定液常用的浓度是5~10%(根据材料的大小、性质和数量而定)。 保存液常用的浓度是5~10%。用福尔马林作保存液,效果好且价格低廉。 在配制福尔马林溶液(固定液或保存液)时,应将37~40%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制5%福尔马林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有1.9~2%,这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。 注意事项: (1)福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸,可适量的加入碳酸钙( )或碳酸镁( )等碱性物质进行中和。 (2)福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低,并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液变浊,影响观察。所以,根据一定保存期的情况,可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液,以防标本变坏。其中如有白色沉淀物,加热后可使它溶解。 (3)市售的福尔马林液常带有酸性,能腐蚀石灰质,因此,最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。 2、酒精(乙醇) 酒精也是常用的固定液,它有强烈的杀菌作用,对组织材料的渗透力较大,固定的快。但是,它的脱水作用较强,在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料,分一级或二级固定,即70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料,最好用二级或三级固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再进行保存。从经济效果来考虑,一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。 市售的工业用酒精浓度是95%左右,因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。 注意事项: (1)在固定材料时要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。 (2)高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本(如脑、脊髓)等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。 (3)为了防止酒精使标本硬化,保存一些精细的材料或解剖标本时,因加入少量甘油,因为甘油具有润软组织的作用。 (4)忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。 3、醋酸 醋酸即乙酸,纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织,因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质,组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合,以起到相互抵消的作用。 醋酸固定液的常用浓度是0.3%~5%。 4、苦味酸 苦味酸是一种黄色结晶,能溶于水(溶解度是0.9~1.2%)、酒精(溶解度是4.9%)和苯(溶解度是10%)。苦味酸也能沉淀一切蛋白质,穿透较慢,固定后,组织收缩明显,但不使组织硬化。 苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克,制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆,长制成饱和水溶液保存。 5、升汞 升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液,有时也用70%酒精作溶剂,不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱,通常用于小型材料,对蛋白质有强烈的沉淀作用,硬化程度中等。 固定液用饱和溶液,浓度约为7%。 6、卡尔氏(Carl’s)液 配方 95%酒精 170毫升 蒸馏水 280毫升 福尔马林 60毫升 冰醋酸 20毫升 冰醋酸要在临用前加入。 这时极好的昆虫保存液,常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油,能防止虫体变脆。 7、卡诺氏(Carnoy’s)液 配方 纯酒精 6份 冰醋酸 1份 氯仿 3份 这种固定液能固定细胞质和细胞核,尤其适宜于固定染色体,所以多用于细胞学的质片,还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快,因此一般小块组织固定20~40分钟,大型材料不超过3~4小时。固定后用95%或纯酒精洗涤,换液两次,移到石蜡中或用80%酒精保存。 8、吉尔桑氏(Gilson)液 配方 60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升 80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克 蒸馏水 440毫升 这是常用的固定液,适用于肉质菌类,特别是柔软胶质状的材料如木耳等,也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间18~20小时,然后用50%酒精冲洗材料,除去升汞。如果用水冲洗,会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。 9、福尔马林--醋酸--酒精溶液(FAA)液 配方 50%酒精 85毫升 福尔马林 10毫升 冰醋酸 5毫升 这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织,昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时,木质化组织要固定1周,材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗1~2次。 10、克来宁堡氏(Kleinenberg’s)液 配方 在20%硫酸水溶液内加入苦味酸,直到饱和。 这种固定液适用于鸡胚的固定,也用于许多小型海洋生物的固定。 11、包因氏(Bouin’s)液 配方 苦味酸饱和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升 福尔马林 25毫升 这是常用的良好固定剂,渗透迅速,固定均匀,组织收缩少,染色后能显示一般的微细结构。一般动物组织、无脊椎动物的卵和幼虫以及一般组织学、胚胎学的材料,如植物组织的根尖和胚囊都可用它来固定。一般组织固定24~48小时,小块组织固定4~16小时,动物材料能在这种固定液中长期保存。固定后,动物材料用70%酒精冲洗净苦味酸,到无黄色为止(用酒精冲洗时,加几滴氨水,可加快除去黄色);植物材料用20%酒精冲洗几次。 12、绍丁氏(Schaudinn’s)液 配方 甲液 升汞饱和水溶液 66毫升 95%酒精 33毫升 乙液 冰醋酸 1毫升 甲、乙液要在临用前混合。 这种固定液适用于固定有鞭毛的原生动物、植物的精子和游动孢子等。材料如制作涂布装片,可在40摄氏度下固定10~20分钟。 13、眼球固定液 配方 丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升 升汞 2克 甲醛 10毫升 蒸馏水 40毫升 这种固定液适用于眼球的固定,并可在固定液中长期保存。 14、纳瓦兴氏(Nawaschin’s)液 配方 甲液 铬酸 1.5克 冰醋酸 10毫升 蒸馏水 90毫升 乙液 福尔马林 40毫升 蒸馏水 60毫升 临用前将等量甲、乙液混合。 高等植物有丝分裂材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。 15、绿色标本保存液 配方一 硫酸铜 5克 水 95毫升 这种保存液适用于绿色植物和一切植物绿色部分的保存。植物放入硫酸铜液后,由绿变黄,再由黄变绿。这时取出材料,用清水漂洗干净,浸在5%福尔马林液内长期保存。 配方二 硫酸铜 0.2克 95%酒精 50毫升 福尔马林 10毫升 冰醋酸 5毫升 水 35毫升 先把硫酸铜溶于水中,然后加入配方中的其他组分。绿色标本能长期的贮存在该液中。 配方三 醋酸铜 15~30克 50%醋酸 100毫升 在50%醋酸中逐渐加入醋酸铜,直到饱和。适用时取原液1份,加水4份,即成稀释的硫酸铜溶液。 这种保存液适用于表面有蜡质、蛙质、质地较硬的绿色植物保色。加热稀释到醋酸铜溶液,放入植物,轻轻翻动,到植物由绿转黄再转绿色时取出植物,用清水漂洗后,浸入5%福尔马林液内保存。 16、红色标本保存液 配方一 甲液 硼酸 3克 福尔马林 4毫升 水 400毫升 乙液 亚硫酸 2毫升 硼酸 10克 水 488毫升 把红色的果实浸在甲液里1~3天,等果实由红色转深棕色时取出,移到乙液里保存,同时在果实内注入少量乙液。 配方二 氯化锌 2份 福尔马林 1份 甘油 1份 水 40份 先把氯化锌溶解在水里,然后加入配方中其他组分。溶液如果浑浊而有沉淀,应过滤后使用。红色果实能在此液中保存。 17、黄色标本保存液 配方一 甲液 硫酸铜 5克 水 95毫升 乙液 6%亚硫酸 30毫升 甘油 30毫升 95%酒精 30毫升 水 900毫升 先把植物标本在甲液中浸1~2天,取出洗净后,浸入乙液中保存,同时在果实内注入少量乙液。 配方二 6%亚硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升 水 450毫升 植物材料能在这种保存液中长期保存。 18、紫色标本保存液 配方一 95%酒精 20毫升 福尔马林 20毫升 水 60毫升 使用时,取1份原液加9份水稀释,植物材料能在这溶液中保存。 配方二 食盐饱和水溶液 30毫升 水 175毫升 福尔马林 20毫升 甘油 少量 植物材料能在这溶液中保存。 19、白色标本保存液 配方一 甲液 5%硫酸铜溶液 乙液 1~4%亚硫酸溶液 全白色植物材料能浸在乙液中保存。杂有绿色的白色植物材料先浸在5%硫酸铜溶液内1~3天,用清水漂洗后浸在乙液中保存。 配方二 氯化锌 32克 95%酒精 125毫升 水 1000毫升 把氯化锌溶于水中,再加入酒精。植物材料能在这溶液中保存。 20、绿色幼虫保存液 甲液 福尔马林 4毫升 醋酸铜 1克 硝酸钾 1克 水 100毫升 乙液 甘油 20毫升 醋酸钾 10克 福尔马林 1毫升 水 100毫升 先把昆虫幼虫放在80摄氏度热水中烫死,晒干后放在甲液中固定1星期左右,最后放入稀释一倍的乙液中保存。 配方二 甲液 95%酒精 90毫升 甘油 2.5毫升 福尔马林 2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升 氯化铜 3克 乙液 冰醋酸 5毫升 福尔马林 4毫升 水 100毫升 将绝食1~2天的幼虫,用注射器从肛门向体内注射甲液,12小时后转入乙液内保存,约20天更换1次乙液。 21、黄色幼虫保存液 甲液 苦味酸饱和液 10毫升 冰醋酸 5毫升 福尔马林 2.5毫升 乙液 与绿色幼虫保存液配方二乙液相同 用注射器从幼虫肛门内注入甲液,12小时后转入乙液内保存。 22、红色幼虫保存液 硼砂 2克 50%酒精 100毫升 昆虫幼虫能在这溶液中保存。 23、动物内脏原色保存液 甲液 福尔马林 200毫升 硝酸钾 15克 醋酸钾 30克 水 1000毫升 乙液 甘油 200毫升 醋酸钾 100克 麝香草酚 2.5克 水 1000毫升 先把材料放在甲液内固定,固定时间根据材料的大小而定,一般需1~5天。当材料失去自然色泽而呈暗褐色时,用手轻轻挤压,直到没有淡红色血水流出时,取出材料,用清水冲洗,在浸在85%酒精中3~24小时(不能太久,否则易破坏色素),到血色恢复后,浸在乙液中保存。 (八)脱水剂 在显微镜制片中,生物实验室最常用的脱水剂是酒精。 1、酒精 市场出售的酒精有95%和100%(纯酒精)两种。高浓度的酒精(95%以上)对组织有强烈的收缩和脆化的缺点,因此材料在水洗后不能立即投入高浓度酒精中。脱水时为了避免材料萎缩、僵硬,应在不同浓度的酒精里逐渐脱水。一般组织(除神经组织、柔软组织外)可从70%酒精开始经80%、95%、100%酒精,使它逐步脱水。对一些柔软组织如胚胎组织、低等无脊椎动物组织,要从70%酒精以下的50%或30%或20%开始,否则组织收缩较大。以上各种浓度的就经常用95%酒精加蒸馏水稀释而成,而不用纯酒精稀释,因为它的价格太贵。 2、质取水酒精 在酒精脱水剂中,无水酒精是最高一级的浓度脱水剂,中学生物实验室一般用一下方法由95~96%的酒精来制取无水酒精。取蓝色的结晶硫酸铜粉末,放入烘箱内烘烤,直到蓝色粉末脱水呈青白色时止。在酒精里放入青白色的硫酸铜粉末(它遇水就转蓝色),直到加入的硫酸铜不变蓝色,表明酒精以呈无水状态,就装瓶密封。 3、回收酒精 脱水用的酒精,使用以后,要按各种浓度分别收集起来。待收到一定量后,就可过滤,并用酒精比重计测定浓度,然后,再用来配置各级低度酒精。如果用过的酒精浓度较低,要蒸馏后再用。 (九)透明剂 1、二甲苯 它是目前应用最广的一种透明剂,价格比较便宜,折光率1.497,易挥发,无色透明液体,易溶于酒精又能溶解石蜡,能跟封藏剂树胶混合,不能和水混合,透明作用强,且迅速。它的缺点是容易使组织收缩变硬、变脆,所以组织不能在其中停留过久,同时材料必须完全脱水后才能应用,否则做成的标本易出现空洞,经封藏后会产生白色云雾状,影响观察和保存。 用二甲苯透明时,一般先用纯酒精和二甲苯等量混合浸1~2小时,置换材料中的酒精,再放在纯二甲笨中透明,总透明时间不宜超过3小时,染色后的制片一般在二甲苯中经过5~10分钟透明即可。 2、甲苯 它的性质和二甲苯相同,价格比较便宜,可作二甲苯的代用品。它的优点是组织在二甲苯中留置12~24小时也不变脆,缺点是透明较慢。 3、苯 它的性质近似二甲苯,易爆炸,人吸入苯能引起中毒,所以用时必须小心。 4、氯仿 组织在其中浸存较久,收缩不太厉害,也不会变脆,容易挥发。它的缺点是渗透力稍弱,透明时间比二甲苯、苯还慢,所以应比二甲苯延长约2~3倍时间。他适于透明大块组织。 5、香柏油 用香柏油作透明剂效果很好。它的折光率是1.515,有高度透明作用,使组织收缩和硬化的程度比任何透明剂(二甲苯、苯、氯仿等)都小,价格较便宜。它的缺点是透明慢,小块组织一般需12小时以上,不易被石蜡所替代,不能跟树胶相混合。为浸腊方便起见,经香柏油透明的组织,尚需再用二甲苯或苯洗几次,除去香柏油,以便加速石蜡的浸透。香柏油极毒,用时必须小心。 嘴纯净的香柏油,可作油镜上用的浸油。 (十)封装剂 1、加拿大树胶 加拿大树胶是半透明的固体树脂,能溶于二甲苯、苯等溶剂。加拿大树胶溶于二甲苯后,它的折光率是1.52,接近于玻璃的折光率(1.51),透明度很好,用以封片几乎无色,干后坚硬牢固,可长期保存。因此,他是封片常用的封藏剂。市售的加拿大树脂有浓液体和固体两种。如果是固体,可以在树胶中加入约相当于树胶体积一半量的二甲苯,放在温暖处,时常搅拌,促使树胶溶化。溶化后的较液浓度以胶液能沿玻璃棒一端顺利下流为宜(如果要封藏后使它干燥更快,可用苯代替二甲苯)。 加拿大树胶在使用和贮存时应注意:1、不能加热,否则树胶立即变成深褐色,影响封片后的观察;2、树胶应贮存在棕色瓶内,避光保存;3、玻璃瓶口应密闭,以防蒸发凝固;4、为了防止树胶变酸,在树胶内加入几小块用二甲苯清洗过的大理石,以中和酸性。 2、阿拉伯树胶 用阿拉伯树胶作为封藏剂的优点是便于在这种封藏剂中整理标本形态。阿拉伯树胶作为封藏剂有多种配方,下述配方适于小型昆虫的整体状片。 配方 阿拉伯树胶 8克 水合氯醛 20~40克 甘油 5毫升 冰醋酸 3毫升(可略) 蒸馏水 10毫升 配置方法 先把纯净的阿拉伯树胶放在蒸馏水里,加热,待胶溶化后,加入水合氯醛,边加边搅拌,使它充分溶解后加入甘油和冰醋酸,搅拌均匀后,贮存在瓶里,密闭保存。贮存时要避免灰尘或湿气浸入。 3、乳酸—石炭酸 这种封藏剂用于整体装片,尤其适用于封藏藻类、菌类、苔藓的原叶体或其他较小材料。 配方 石炭酸 1份 乳酸 1份 甘油 1~2份 蒸馏水 1份 (十一)消毒剂 1、酒精 70%的酒精杀菌力最强,它能使蛋白质脱水和变性,在3~5分钟内杀死细菌。因此,它用于消毒和防腐,适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精(95~100%)能引起菌体表层蛋白质凝固,形成保护层,使酒精分子不易透入,因此杀菌能力反而弱。 2、碘酒 碘酒是碘和碘化钾的酒精溶液,2%的碘酒在10分钟内能杀死细菌和芽 孢,可用于皮肤的消毒。药房出售的一般是2%的稀碘酒。实验室内也可自配碘酒,配方为: 碘化钾 25.克 碘 3.5克 95%酒精 95%酒精 蒸馏水 27毫升 先取碘化钾溶在2毫升蒸馏水中,再加入碘,搅拌后加入酒精,到碘充分溶解后,补足蒸馏水,即成碘酒。 3、高锰酸钾 高锰酸钾是强氧化剂,有很强的杀菌作用。0.1%水溶液用作皮肤消毒,2~5%水溶液能在24小时内杀死细菌芽孢。这溶液在空气中溶液分解,失去氧化能力,要现用现配。 4、苯酚(石炭酸) 石炭酸是有效的常用杀菌剂,1%水溶液能杀死大多数的菌体,通常用3~5%水溶液作接种室喷雾消毒或器皿的消毒,5%以上溶液对皮肤有刺激性。在生物制品中,加入0.5%石炭酸可作防腐剂。 5、来苏尔 来苏尔即煤酚皂溶液。它的杀菌效力比石炭酸大4倍,通常以1~2%溶液用于手的消毒(浸泡2分钟)和无菌室内喷雾消毒,5%溶液多用于各种器械和器皿的消毒。 6、新洁尔灭 新洁尔灭是常用的消毒剂,主要用于皮肤、医疗器械、器皿、接种室空气等的消毒灭菌,对许多非芽孢型病原菌、革兰氏阳性菌和阴性菌经几分钟接触即灭菌,尤其对格兰氏阳性菌杀菌力更大。本品原液的浓度是5%,通常用0.1~0.25%水溶液。用新洁尔灭消毒金属器械时,要在1升溶液中加入5克亚硝酸钠,以防生锈。 7、福尔马林 福尔马林是常用的杀细菌、真菌剂。它的2~5%水溶液能在24小时内杀死细菌芽孢,常用来消毒器皿和器具。如果用作无菌室等房屋消毒,取100毫升福尔马林,放在盆内,用小火微热,促使蒸发,在10小时内可消菌3立方米左右体积房屋的空气。 (十二)麻醉剂 1、乙醚 它是无色澄明液体,味灼热,有强挥发性和易燃性。乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹,因此乙醚吸入法是最常用的麻醉方法。 使用乙醚麻醉鼠类、蛙类时,可将动物放在玻璃钟罩或烧杯中,把蘸有乙醚的棉花球或纱布投入容器内,动物容器内的乙醚蒸气即被麻醉。 使用乙醚麻醉鸽等鸟类时先把动物用纱布包裹固定,取25毫升小烧杯1个内装蘸有乙醚的棉花球把动物头部放入杯内,使它不断吸入乙醚蒸气,动物很快进入麻醉状态。 用乙醚麻醉家兔时取一个较大的容器,用麻醉大鼠等方法使它麻醉,或取一个大烧杯照麻醉鸟类的方法使用权它麻醉。 2氨基甲酸乙酯(乌拉坦) 它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉未,无臭味。它是较温和的麻醉药,安全度大,多数实验动物都可使用,更适合于动物。 氨基甲酸乙酯作为麻醉剂,使用时常配成20%水溶液。家兔:直肠藻注1。5克/千克体重;皮下、静脉、腹腔注射0.75~1克/千克体重。蛙类:2克/千克体重,由背部淋巴囊注射。鸟类:1.25克/千克体重,由肌肉注入。鼠:1.5~2克/千克体重,由腹腔注射。在作静脉注射时必须溶在生理盐水中(哺乳类为8.5~9.0)配成10%的溶液,即每千克重注射10毫升。 3硫酸镁(泻盐)和薄荷脑 这两种药品是水溶性麻醉药,麻醉动物所需时间较长,适合于麻醉身体(或某些器官)易收缩、变形的水生动物。使用时,将硫酸镁配制成饱和水溶液,逐滴加入盛有动物的水中,使它逐渐被麻醉。蒲荷脑可装在纱布袋内或直接撒在水面上,使它慢慢溶解、扩散,而达到目的。 (十三)防腐剂 1无毒防腐剂 配方 硼酸粉 2份; 明矾 1份; 樟脑粉 1份 把上述3种粉末混合匀后撒在剥制好的动物皮内。这种防腐剂比咬适宜于中学学生实验时使用。 2亚砷酸膏 配方 肥皂 50克; 亚砷酸 50克; 樟脑粉 20克; 水 150毫升 把肥皂切成蒲片,加入少量水,加热煮化,再加足水用微火煮成米汤状,然后放入亚砷酸的樟脑粉,用玻璃棒搅和,冷却后,凝成糊状。 (十四)密封剂 1石蜡封瓶剂 配方 石蜡(熔点52度)1份; 松香 1份;甘油 数滴 把上述配方中各组分别加热熔化。擦干瓶口和玻璃瓶盖,把瓶盖浸入热的石蜡液中。在瓶口也涂上热的石蜡液,塞紧后,把标本瓶倒过来,轻轻地放在熔融了的蜡液中,到瓶口突出的外缘全部浸入为止。再迅速地把瓶提出来。瓶口密封后,瓶盖上覆一块纱布,上面再覆一块圆形透明的塑料薄膜,用线扎紧,即完成瓶封。 2、赛璐珞—有机溶剂封瓶剂 取赛璐珞例如废乒乓球剪碎后,浸入在乙醚、工业用丙酮或氯仿(三氯甲烷)等有机溶剂中(一个乒乓球大约用有机溶剂70毫升),加盖后静置2~3天。经常搅拌,待充分溶化成稀浆糊状时,用毛笔蘸取,涂在标本瓶瓶口和瓶塞四周,随着溶剂蒸发,瓶口处就留下一层不透气的薄膜。 3、环氧树脂封瓶剂 配方 618或634环氧树脂 10份 乙二胺 0.5份 苯二甲酸二丁脂 2份 将上述配方三组分调和均匀后,立即涂在封口处,2~3天后就能干固。 (十五)其他配方 1、缓冲液(用于瑞氏染液) 1%磷酸二氢钾 30毫升 1%无水麟酸氢二钠 20毫升 蒸馏水 加到1000毫升 2、重铬酸钾洗液 重铬酸钾 20克 水 100毫升 浓硫酸(粗制) 100毫升 配取时先把重铬酸钾溶于100毫升水中,然后慢慢加入浓硫酸,切不可把水倒入浓硫酸中。 3、抗凝血剂 配方一 草酸钾 2克 氯化钠 6克 蒸馏水 100毫升 在10毫升血液中加入1毫升抗凝血剂 配方二 在10毫升血液中加入0.2克柠檬酸钠 4、红细胞保存液 配方 柠檬酸钠 2.2克 柠檬酸 0.8% 葡萄糖 2.45克 蒸馏水 加至100毫升 取上述保存液75毫升跟500毫升新鲜血液相混。 5、血细胞稀释液 配方一 红细胞稀释液 氯化高汞 0.25克 硫酸钠 2.5克 氯化钠 0.5克 蒸馏水 加至100毫升 这种稀释液用于红细胞计数。在这溶液中加入0.05克曙红B后,常作为血涂片的染色剂。使用时,取1份血液跟100份这种染色剂混合。 配方二 白细胞稀释液 冰醋酸 1.5毫升 1%龙胆紫 1毫升 蒸馏水 加至100毫升 6、甘油蛋白粘剂 打破两只鸡蛋,倒入烧杯内,取出蛋黄,留下蛋白,用筷子调打成雪花状泡沫,然后用粗滤纸或双层纱布过滤。在滤出的透明蛋白液内加入等量的甘油,混合均匀后,加入少量麝香草酚(1:100)作防腐用。
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